Efeito de solução fisiologica e cloreto de guanidina





























Autor: João Batista Gifoni Vieira
[pt] Analise bioquimica e morfologica do efeito de solução fisiologica e cloreto de guanidina sobre cartilagem xifoide de frango
Instituição de Defesa: Universidade Estadual de Campinas . Instituto de Biologia
Data de Defesa: 2000-12-15
Resumo: [pt] A matriz extracelular de cartilagem é constituída por moléculas de colágeno, proteoglicanos e proteínas não colagênicas. Estes componentes normalmente interagem fortemente entre si sendo dessa forma só extraídos em presença de agentes caotrópicos como o c1oreto de guanidina 4M. A extração utilizando estes agentes geralmente é precedida de homogeneização em solução de PBS (NaCl 0,15M, 5mM de tampão fosfato de sódio pH 7,4), seguida de uma centrifugação onde o sobrenadante é descartado, e a extração é continuada com o precipitado. Neste trabalho foram analisados os componentes presentes no extrato em PBS da cartilagem xifóide de frango, e comparado com o extrato obtido com c1oreto de guanidina. Também foram avaliadas a estabilidade dos componentes da matriz diante da presença de PBS e c1oreto de guanidina. Foram identificadas as proteínas com Mr de 30,40,52,58 e 110 kDa no extrato em PBS. Pequenos proteoglicanos foram detectados nos extratos obtidos a partir do tratamento em guanidina mas não em PBS, o que sugere a existência de interações que não foram rompidas com soluções de baixa força iônica. Análise dos efeitos de PBS e guanidina em cortes de cartilagem posteriormente corados com azul de toluidina e ponceau S, mostraram que embora o PBS extraia alguns componentes da matriz, não tem efeito sobre a organização do tecido, como ocorre quando o tratamento é feito com cloreto de guanidina. Os resultados encontrados sugerem que parte das proteínas não colagênicas da matriz não estão envolvidas em processos interativos
[en] The extracelular matrix of cartilages is composed of colagen, proteoglycans and non colagenous proteins. These components may interact strongly amongst themself, so they only can be extracted using chaotropic agents as guanidinium chloride 4M. Normally the extraction in this treatment is preceded by a homogeneization in PBS solution (0.15M NaCl, 5mM phosphate buffer pH 7.4), followed by a centrifugation to obtain a preciptate which is used for extraction in guanidinium.chloride. In this work the components of the chicken xyphoide cartilage present in the PBS extract were analyzed and compared with the extract obtained with guanidinium chloride. The stability of matrix components was also analyzed. In the PBS extract were identified the proteins with 30, 40, 52, 58 and 110 kDa. Small proteoglycans were detected in the guanidinium but not in PBS extracts, sugesting that they are strongly bound to other components of the matrix. The analysis of the effects of PBS and guanidinium in cartilage sections afterward stained with toluidine blue and ponceau S, showed that a1though PBS doesnot remove substantial amount of glycosaminoglycans, it causes structural changes in the organization of the extracelular matrix. However the effect is much smaller than the guanidinium. Our results indicate that part of the non collagenous protein are not entangled in interactive processes
Titulação: Mestre em Biologia Celular e Estrutural
Contribuidor(es): Edson Rosa Pimentel [Orientador]
Edson Rosa Pimentel
Marcelo Augusto Marretto Esquisatto
Benedicto de Campos Vidal
Assuntos: [pt] Matriz extracelular
[pt] Frango de corte
[pt] Cartilagem
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