Uso da eletroforese de enzimas constitutivas





























Autor: Edvaldo Antonio Ribeiro Rosa
[pt] Uso da eletroforese de enzimas constitutivas na caracterização interespecifica de leveduras orais
Instituição de Defesa: Universidade Estadual de Campinas . Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Data de Defesa: 2000-11-13
Resumo: [en] In the present thesis, it was intended to establish the existing diversity grades among different yeast speeies of Candida genus isolated ITom oral eavities of healthy individuais by means of multiloeus enzyme electrophoresis. For this, representative strains of different species of Candida (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei, e C. guilliermondii) and their respective type-strains were grown in liquid eulture medium bottles, whieh, after ineubation (37°C, 15Orprn, 18 hours), were centrifuged and their pellets were washed. The cell masses were processed in a Mini Bead-beater cell disrupter in order to obtain the crude cytosolie extracts, whieh were separated by stare gel electrophoresis. The enzymatic activity was aeeessed for 20 systems: alcohol dehydrogenate (ADH), lactate dehydrogenate (LDH), maltase dehydrogenate (MDH), isocitrate dehydrogenase (IDH), glueose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH), aspartate dehydrogenase (ASD), glueose dehydrogenase (GDH), mannitol dehydrogenase (MADH), sorbitol dehydrogenase (SDH), aconitase (ACO), malie enzyme (ME), eatalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), glutamie-oxalaeetate transaminase (GOT), a-esterase (EST), esterase (EST), leueine aminopeptidase (LAP), glueosil transferase (GTF), peroxidase (PO) e aamylase (a-AM). From revealed gels it were built the diagrams representing the electrophoretie banding mobilities that allowed the Construction of similarity phenograms for eaeh enzymatie system. The systems whieh furnished detectable bands allowed the speeies diversity analysis in phenetie and genetie tenns, what allowed the writing of four original papers. On these artieles one ean notiee the diversity aeeessed ITom the overall analysis of enzymes, Itom the overall analysis dehydrogenases, and ITom the genetie ana1ysis of different loei, as good as one eomparison of diseriminatory eapacity determined by multiloeus enzyme electrophoresis (MLEE) and whole-cell protein eleetrophoresis on polycrylamide gel slabs (SDS-P AGE)
[pt] Na presente tese, buscou-se estabelecer os graus de diversidade existentes entre diferentes espécies de leveduras do gênero Candida isoladas da cavidade oral de indivíduos saudáveis por meio do emprego da técnica de eletroforese de enzimas constitutivas. Para tanto, linhagens representativas de diferentes espécies de Candida (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei, e C. guilliermondii) e também suas respectivas linhagens-tipo foram crescidas em frascos com meio de cultura líquido, os quais após incubação (37ºC, 150rprn, 18 horas) foram centrifugados e seus pel/ets lavados. As massas celulares obtidas foram processadas num disrruptor celular tipo Mini Bead-beater que permitiu a obtenção dos extratos citossólicos brutos, os quais foram aplicados em tiras de papel de filtro e suas proteínas separadas por eletroforese em gel de amido. A atividade enzimática foi acessada para 20 sistemas: álcool desidrogenase (ADH), lactato desidrogenase (LDH), malato desidrogenase (Iill)H), isocitrato desidrogenase (IDH), glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH), aspartato desidrogenase (ASD), glucose desidrogenase (GDH), manitol desidrogenase (MADH), sorbitol desidrogenase (SDH), aconitase (ACO), enzima málica (ME), catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), transaminase glutâmico-oxalacética (GOT), a-esterase (EST), B-esterase (EST), leucina aminopeptidase (LAP), glicosil transferase (GTF), peroxidase (PO) e a-amilase (a-AM).A partir dos géis revelados foram feitos os diagramas representativos da mobilidade eletroforética das bandas que permitiram a confecção de fenogramas de similaridade para cada sistema enzimático. Os sistemas que forneceram bandas perceptíveis permitiram a análise da diversidade das espécies analisadas tanto em termos fenéticos quanto genéticos, que possibilitaram a redação de quatro artigos originais. Nesses originais pode-se observar a diversidade acessada através da análise conjunta de todas enzimas, da análise conjunta de todas as desidrogenases, e da análise genética dos diferentes loci, bem como uma comparação da capacidade discriminatória estabelecida entre a técnica de eletroforese de enzimas constitutivas (MLEE) e a técnica de eletroforese de proteínas totais em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE)
Titulação: Doutor em Odontologia
Contribuidor(es): Jose Francisco Hofling
Fernando C. Pagnocca
Antonio A. S. de Lima
Reginaldo B. Gonçalves
Jose Francisco Hofling [Orientador]
Mario T. Shimizu
Assuntos: [pt] Candida
[pt] Isoenzimas
[pt] Analise numerica
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